凍干樣品的保存期與樣品的含水量也就是水分含量有顯著的關(guān)系,含水量越高,反應(yīng)越劇烈,保存期越短,越容易發(fā)生變性,水解氧化等各種反應(yīng)。因此控制凍干樣品的含水量非常關(guān)鍵,測定含水量是嚴(yán)重我們凍干工藝的一個(gè)重要手段。測試含水量的方法有:費(fèi)休氏法、加熱失重法、減壓干燥法等。其中基于費(fèi)休氏法的方法包括容量滴定法和庫倫滴定法。IVD凍干樣品由于樣品含量比較少,大部分都是微升級(jí)別,適合費(fèi)休氏法。制藥行業(yè)凍干樣品測量含水量相對(duì)精準(zhǔn)也是采用此法。
引用藥典中的容量滴定法。
本法是根據(jù)碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中與水定量反應(yīng)的原理來測定水分。所用儀器應(yīng)干燥,并能避免空氣中水分的侵入;測定應(yīng)在干燥處進(jìn)行。
費(fèi)休氏試液的制備與標(biāo)定
?。?/span>1)制備 稱取碘(置硫酸干燥器內(nèi)48小時(shí)以上)110g,置干燥的具塞錐形瓶(或燒瓶)中,加無水吡啶160ml,注意冷卻,振搖至碘全部溶解,加無水甲醇300ml,稱定重量,將錐形瓶(或燒瓶)置冰浴中冷卻,在避免空氣中水分侵入的條件下,通入干燥的二氧化硫至重量增加72g,再加無水甲醇使成1000ml,密塞,搖勻,在暗處放置24小時(shí)。
也可以使用穩(wěn)定的市售費(fèi)休氏試液。市售的費(fèi)休氏試液可以是不含吡啶的其他堿化試劑,或不含甲醇的其他伯醇類等制成;也可以是單一的溶液或由兩種溶液臨用前混合而成。
本試液應(yīng)遮光,密封,陰涼干燥處保存。臨用前應(yīng)標(biāo)定滴定度。
?。?/span>2)標(biāo)定 精密稱取純化水10~30mg,用水分測定儀直接標(biāo)定;或精密稱取純化水10~30mg,置干燥的具塞錐形瓶中,除另有規(guī)定外,加無水甲醇適量,在避免空氣中水分侵入的條件下,用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色,或用電化學(xué)方法[如永停滴定法(通則0701)等]指示終點(diǎn);另做空白試驗(yàn),按下式計(jì)算:
F=W/(A-B)
式中 F為每1ml費(fèi)休氏試液相當(dāng)于水的重量,mg;
W為稱取純化水的重量,mg;
A為滴定所消耗費(fèi)休氏試液的容積,ml;
B為空白所消耗費(fèi)休氏試液的容積,ml。
測定法 精密稱取供試品適量(約消耗費(fèi)休氏試液1~5ml),除另有規(guī)定外,溶劑為無水甲醇,用水分測定儀直接測定。或精密稱取供試品適量,置干燥的具塞錐形瓶中,加溶劑適量,在不斷振搖(或攪拌)下用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色,或用永停滴定法(通則0701)指示終點(diǎn);另做空白試驗(yàn),按下式計(jì)算:
供試品水分含量(%)=(A-B)*F/W*100%
式中 A為供試品所消耗費(fèi)休氏試液的體積,ml;
B為空白所消耗費(fèi)休氏試液的體積,ml;
F為每1ml費(fèi)休氏試液相當(dāng)于水的重量,mg;
W為供試品的重量,mg。
如供試品吸濕性較強(qiáng),可稱取供試品適量置干燥的容器中,密封(可在干燥的隔離箱中操作),精密稱定,用干燥的注射器注入適量無水甲醇或其他適宜溶劑,精密稱定總重量,振搖使供試品溶解,測定該溶液水分。洗凈并烘干容器,精密稱定其重量。同時(shí)測定溶劑的水分。按下式計(jì)算:
供試品水分含量(%)=[(W1-W3)c1-(W1-W2)c2]/(W2-W3)*100%
式中 W1為供試品、溶劑和容器的重量,g;
W2為供試品、容器的重量,g;
W3為容器的重量,g;
c1為供試品溶液的水分含量,g/g;
c2為溶劑的水分含量,g/g。
對(duì)熱穩(wěn)定的供試品,亦可將水分測定儀和市售卡氏干燥爐聯(lián)用測定水分。即將一定量的供試品在干燥爐或樣品瓶中加熱,并用干燥氣體將蒸發(fā)出的水分導(dǎo)入水分測定儀中測定。